Estudio de la termoestabilizacion mediante la construccion de proteinas hibridas y tecnicas de evolucion molecular



Autor:

arraztio garcia ana m

Universidad:

autónoma de madrid

Departamento:

Informacion no disponible

Fecha de lectura:

01-01-1998

Director:


berenguer de carlos, jose
TRIBUNAL

Presidente:

amils pibernat, ricardo

Secretario:

garcia del portillo, francisco

Vocal:

rivilla palma, rafael

Vocal:

pisabarro de lucas gerardo

Vocal:

bonete perez maría josé


Descriptores:


line

Resumen:


La termoestabilidad está definida por una serie de factores, entre los que destaca el hecho de que las proteínas procedentes de termófilos sean termoestables per se. En algunas ocasiones, se han estudiado las características que determinan esta termoestabilidad, y mediante su aplicación, se han intentado termoestabilizar proteínas mesófilas. Dos aproximaciones alternativas son la evolución molecular y la construcción de proteínas híbridas. En este trabajo, se ha intentado termoestabilizar el gen cat-194, que codifica para resistencia a cloranfenicol. Sin embargo, tras realizar la mutagénesis al azar mediante ultravioleta, se obtuvo un gen que, si bien es activo a 65 C, no se encuentra mutado. Por otra parte, se construyeron proteínas híbridas entre la glucosamina sintasas (GlmS) de Thermus y E. coli. Estas proteínas híbridas, conteniendo cada una un dominio de cada organismo, presentaban propiedades intermedias de estabilidad entre las de las proteínas parentales. Además, tenían afectada su catálisis, lo que sugiere que las proteínas híbridas tenían alterado su equilibrio monómero inactivo- dímero activo. Por último, mediante estudios de modelados pudo predecirse que la proteína que contenía el dominio amino-terminal de E. coli era la más inestable, lo que quedó probado con los estudios realizados tanto en extractos crudos como en extractos puros. Como conclusión, podemos decir que las proteínas híbridas son un método de obtener propiedades intermedias entre dos proteínas, así como una forma de estudiar sus propiedades catalíticas.